Elisa-test

Ja, du har helt rätt. Först binds antigenet till väggar o botten i brunnen. Sen har man i en antikropp som är specifik för antigenet. Denna (primära) antikropp har man nog inte så mkt av så det hade blivit dyrt o jobbigt att binda enzymet (som vi kommer strax till) den. Den sekundära antikroppen är specifik mot den primära. Troligen är den primära från mus el människa. Antikroppar har strukturer som alltid är likadana, tex. strukturer på Fc-delen (skaftet), o det är mot dessa man riktar den sekundära. Denna kan framställas i stora mängder då den är likadan i alla ELISA-tester o det är på den man har fäst ett enzym som ger ett färgomslag. På så sätt har man en kedja med: antigen, primär AK, sekundär AK, enzym. Mängden enzym (o således även mängden antigen) mäts då med hjälp av färgomslaget. 

Sen finns det varianter på ELISA men detta är originalversionen som utvecklades av Perlmann/Engvall o vid Sthlms universitet i början av 70-talet.

matstnilsson skrev:

Ja, du har helt rätt. Först binds antigenet till väggar o botten i brunnen. Sen har man i en antikropp som är specifik för antigenet. Denna (primära) antikropp har man nog inte så mkt av så det hade blivit dyrt o jobbigt att binda enzymet (som vi kommer strax till) den. Den sekundära antikroppen är specifik mot den primära. Troligen är den primära från mus el människa. Antikroppar har strukturer som alltid är likadana, tex. strukturer på Fc-delen (skaftet), o det är mot dessa man riktar den sekundära.

Nej, inte riktigt. Fc-delen av antikroppen har en generell/delad typ av struktur, som mellan de flesta arter är på ett övergripande plan lika.

Inom en art är Fc-domänen den samma, brukar anges som "konstant". Denna Fc-domän skiljer sig dock mellan arter. Därför behöver Fc-delen hos den primära antikroppen matchas mot den sekundära antikroppen. En sekundär antikropp som känner igen den mänskliga varianten av Fc-domänen, känns igen av en antikropp mot just denna mänskliga Fc-domän.

Det går m.a.o. inte att använda en sekundär antikropp med affinitet för mus Fc-domänen om den primära antikroppen kommer ifrån människa - därför behöver primär och sekundär antikropp matchas.

Mattemasken skrev:

Jag har under en labb gjort ett Elisa-test där vi först tillsatte ett syntetiskt prov till mikrobrunnarna, sedan tillsattes först primära antikroppar, sen sekundära antikroppar och sist ett enzymsubstrat. Mellan varje steg tvättades obundna antikroppar bort. Först binder antigenerna i provet till brunnarna, sen binder de primära antikropparna till antigenerna. Sen förstår jag inte riktigt vad som händer, binder de sekundära antikropparna till de primära? Och vad är syftet med enzymsubstrat? Antar att det har med färg reaktionen att göra.

Om du tittar på beskrivningarna av antikropparna och enzymet, borde du tillsammans med deras namn kunna koppla ihop hur de binder, såsom matsnilsson beskrev.

Ofta underlättas förståelsen av att rita ut hur de binder till varandra och skriva ut namnen i skissen, det brukar bli mer övergreppbart på papper.